Группа Tom Tuschl обнаружила, что трансфекция

Четверг, 15 Март, 2012

Группа Tom Tuschl обнаружила, что трансфекция синтетической 21 – нуклеотидной двухцепочечной РНК(siRNA) была высоко специфичной и являлась последовательность – специфичным ингибитором эндогенных генов в клетках млекопитающих. Экспрессия РНК, подавляющих транскрипцию, изучалась с помощью РНК из плазмид и вирусных векторов. Они доставляют подавляюшую экспрессию РНК как в делящиеся, так и в неделящиеся клетки, столовые клетки, зиготы и их делящиеся потомство.

Коллекция векторов RNAi, которые супрессируют 50 человеческих ферментов позволила Thijn Brumme lkamp с коллегами изучить семейство генов и определить эти энзимы в значимых для опухолей путях ((Nature 2003; 424: 797-801). Эти исследователи обнаружили, что ген супрессор семейной цилиндроматозной опухоли, функция которого до сих пор была не известна, может способствовать активации фактора транскрипции NF-kappaB, что ведет к увеличению устойчивости к апоптозу. Они начали в настоящее время изучать использование ингибиторов этого гена в клинике. Способность эффективно и стабильно продуцировать и доставлять достаточные количества siRNA в надлежащие ткани-мишени нуждается в совершенствовании перед применением в клинике. Начальные исследования in vivo показали эффективную трансгенную супрессию синтезированными siRNA у взрослых мышей. В более недавнее время многие исследователи использовали плазмидные вирусные векторы для транскрипции коротких шпилечных РНК in vivo и in vitro. В этих системах экспрессии экспрессия генов более стабильно ингибировалась, чем у транзиентных нокдаунов, химически синтезированной siRNA. Должны вскоре последовать исследования на человеке, использующие эти последние открытия/50/ . Интерференция РНК (RNAi) является последовательность – специфичным подавлением активности генов, индуцированным двухцепочечной РНК. Она представляет собой инструмент избирательного подавления экспрессии генов.

Недостатками использования плазмидных ДНК, кодирующих siRNA, являются: ‘токсичность’, низкий уровень трансфекции по сравнению с химически синтезированными siRNA. 1.2.Техника микрочипов ДНК. Микрочипы ДНК используются для одновременного определения уровней тысяч иРНК в образце. Коллекция таких измерений в различных клеточных типах и состояниях является надежным источником для функциональных предсказаний при том условии, что microarray эксперименты являются аналогичными, и образцы клеток достаточно разнообразны. Этот подход использовался для изучения стволовых клеток, чья идентичность и механизмы контроля не достаточно хорошо понимаются.

Группа Tom Tuschl обнаружила, что трансфекция