МОЛЕКУЛЯРНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ СТВОЛОВЫХ

Четверг, 15 Март, 2012

1.МОЛЕКУЛЯРНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК. В настоящее время для изучения стволовых клеток особое значение приобрели следующие молекулярно биологические методы: интерференция РНК и техника микрочипов, а также метод генных ловушек, протеомный анализ, генетическая трансформация. 1.1.Интерференция РНК. Интерференция РНК – это механизм, имеющий место в большинстве эукариотических клеток для избавления от чужеродных двухцепочных молекул РНК. В течение шести лет после первого сообщения об интерференции РНК было продемонстрировано, что она изменяет экспрессию генов в клетках млекопитающих и широкого спектра эукариот, и ее использовали, как средство генетических исследований точно так же, как возможную стратегию генетической коррекции/53/. Интерференция РНК (RNAi) была признана мощным орудием идентификации функции генов во многих биологических процессах, она может быть использована для широких генетических исследований в клетках млекопитающих. Для этих целей кассеты, которые индуцируют RNAi, могут быть эффективно введены в геном клеток хозяина с использованием вирусных векторных систем, что приводит к подавлению экспрессии генов – мишеней. Временное подавление экспрессии генов может быть также индуцировано экзогенным введением подходящих триггеров RNAi в клетки – мишени/39/. Интерференция РНК(RNAi), эволюционно крайне консервативный процесс транскрипционного (путем метилирования ДНК) и посттранскрипционного подавления активности гена, может быть запущен малыми интерферирующими РНК(siRNA) , которые опосредуют последовательность – специфичную деградацию иРНК. Со времени первого сообщения в 1998 году RNAi быстро развилось в эффективный инструмент для специфичного выключения экспрессии генов у большого разнообразия клеток – мишеней.

В соответствии с этим RNAi в настоящее время используется как для систематического функционального анализа генома у некоторых организмов, так и для специфического терапевтического вмешательства в преклинических моделях различных болезней, характеризуемых нарушенной экспрессией генов. Однако поскольку siRNA не реплицируется в клетках млекопитающих в течение процесса интерференции РНК, кинетические аспекты siRNA – индуцированного подавления активности генов, которые, в конечном счете, зависят от внутриклеточного уровня siRNA, должны быть рассмотрены для каждого аналитического или терапевтического приложения в этих клетках/40/. Интерференция РНК(RNAi) является последовательность – специфичным подавлением активности генов, индуцированным двухцепочечной РНК(dsRNA) , которая быстро дает информацию о функции генов. Использование RNAi для генной терапии широко изучается, в особенности при вирусных инфекциях, опухолях и наследственных генетических заболеваниях.

RNAi использовалась для получения мышей c нокдауном для изучения функционирования генов в целом животном. Совместно с данными геномики подавление активности генов с помощью RNAi может способствовать определению функции любого гена, экспрессируемого в клетке. Термин RNAi появился в связи с открытием, что инъекция dsRNA у Caenorhabditis elegans интерферирует с экспрессией специфических генов, содержащих комплементарную область в введенной dsRNA. У млекопитающих введение длинных dsRNA (длиннее, чем 30 нуклеотидов) вызывает неспецифический интерфероновый ответ, что приводит к приостановлению экспрессии всех генов и гибели клетки.

МОЛЕКУЛЯРНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ СТВОЛОВЫХ